席夫碱法制备大孔聚合物肝素亲和层析介质 |
| |
作者姓名: | 古嘉如 王楠 马磊 乔娟 靳海波 何广湘 赵岚 黄永东 张荣月 |
| |
作者单位: | 1. 北京石油化工学院,新材料与化工学院/燃料清洁化及高效催化减排技术北京市重点实验室;2. 中国科学院过程工程研究所,国家生化工程国家重点实验室 |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(编号:22074148);;国家重点研发计划课题(编号:2021YFC2103401); |
| |
摘 要: | 肝素亲和层析介质因其专一性好、操作条件温和等特点,广泛应用于蛋白分离纯化,本工作以大孔聚丙烯酸酯微球为基质,肝素为配基,利用席夫碱法制备了肝素亲和层析介质。配基偶联经过三步完成,首先将大孔聚丙烯酸酯微球表面环氧基团通过0.5 mol/L H2SO4水解为邻羟基,然后将邻羟基氧化为醛基,最后利用醛基与肝素分子的胺基反应将肝素分子固定于微球表面。以溶菌酶为模型蛋白,主要考察了肝素偶联反应的各因素对蛋白结合容量的影响规律,包括肝素浓度、缓冲液pH及浓度、反应时间等,建立了最优偶联肝素配基的方法。所得亲和介质静态结合容量可达40.3 mg/mL,比商品GP-肝素介质高约36%,经1.0 mol/L的氯化钠洗脱,其蛋白回收率达到95%。通过扫描电子显微镜表征微球表面形貌,观察到偶联肝素后的微球仍能保持其大孔结构。考察了该类亲和介质在不同操作流速(31.8~318 cm/h)下的动态结合容量,发现操作流速提高10倍后介质结合容量仅下降12%。经10次重复使用后,动态结合容量仍可保持初始容量的81%。用于混合蛋白模型中分离乳铁蛋白,结果表明具有良好的分离效...
|
关 键 词: | 亲和层析 肝素 大孔层析介质 偶联方法 席夫碱法 |
|