大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶定点突变及其酶学性质初步研究

L-谷氨酸脱羧酶(L-glutamate decarboxylase,GAD)是生物法生产GABA的关键酶,但是野生型L-谷氨酸脱羧酶的最适pH过低,这限制了它的工业应用。本文对编码来源于大肠杆菌谷氨酸脱羧酶的gadB基因进行了定点突变,分别构建了表达野生型GadB和突变型GadBΔHT的基因工程菌。在获得高表达的基础上,对两个酶的最适温度、最适pH、温度稳定性和pH稳定性进行了系统研究,证实了突变酶GadBΔHT在保持了与野生型相当的催化活性的前提下,表现出更广泛的pH适应能力,在pH3.4~6.2的范围内,仍能保持50%以上的催化活性。突变酶更能适应工业生产的需要,降低生产成本,对于实际应用具有重要价值。