| CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 陈旺,俞竟,屈强,张伟,李智,吴兰香,温纯洁,周宏灏. CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立[J]. 金属学报, 2012, 17(3): 263-268 |
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| 作者姓名： | 陈旺 俞竟 屈强 张伟 李智 吴兰香 温纯洁 周宏灏 |
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| 作者单位： | 1.重庆医科大学生命科学研究院,重庆 400016,重庆;2.中南大学临床药理研究所,长沙 410078,湖南 |
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| 基金项目： | 重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ090306);重庆市自然科学基金(cstc2011jjA10004);国家自然科学基金(84402511) |
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| 摘 要： | 目的: 构建细胞色素P450 CYP2C19*1、*2、*3真核表达载体,并分别转染人肝癌细胞(HepG2),建立高表达目的基因的稳定转染细胞系。方法: 应用化学合成法合成CYP2C19*1(野生型)序列,再以此为模板,体外定点突变PCR法构建*2、*3(突变型)。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.l(-),经菌落PCR、酶切以及测序鉴定后,脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot 分别检测CYP2C19*1、*2、*3 mRNA以及蛋白的表达。结果: 成功构建了pcDNA3.1(-)-CYP2C19*1、*2、*3表达质粒,并建立了相应稳定转染细胞系。进一步的RT-PCR和Western Blot检测结果表明,目的基因均得到了稳定的表达。结论: 人CYP2C19*1、*2、*3稳定表达细胞系为研究创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测以及为临床潜在药物相互作用提供了有效实验平台。
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| 关 键 词： | CYP2C19 基因多态性 真核表达 转染 |
| 收稿时间： | 2011-12-12 |
| 修稿时间： | 2012-01-18 |
Construction of human CYP2C19 gene polymorphism eukaryotic expression vector and establishment of stably transfected HepG2 cell line expressing human CYP2C19 |
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| CHEN Wang,YU Jing,QU Qiang,ZHANG Wei,LI Zhi,WU Lan-xiang,WEN Chun-jie,ZHOU Hong-hao. Construction of human CYP2C19 gene polymorphism eukaryotic expression vector and establishment of stably transfected HepG2 cell line expressing human CYP2C19[J]. Acta Metallurgica Sinica, 2012, 17(3): 263-268 |
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| Authors: | CHEN Wang YU Jing QU Qiang ZHANG Wei LI Zhi WU Lan-xiang WEN Chun-jie ZHOU Hong-hao |
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| Affiliation: | 1.Institute of Life Sciences, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China;2.Institute of Clinical Pharmacology, Central South University, Changsha 410078, Hunan, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CYP2C19 Gene polymorphism Eukaryotic expression vector Transfection |
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