| pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用 |
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| 引用本文： | 刘丹,钟斌,万青,曾姝,吴晓牧,何明. pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用[J]. 金属学报, 2012, 17(12): 1333-1338 |
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| 作者姓名： | 刘丹 钟斌 万青 曾姝 吴晓牧 何明 |
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| 作者单位： | 1.南昌大学药学院药理学与分子治疗学教研室,南昌 330006,江西;2.江西省人民医院神经内科,南昌 330006,江西;3.赣南医学院第一附属医院, 赣州 341000,江西 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81160402, 81072632, 81100104); 博士后科学基金资助(20110491496); 江西省自然科学基金资助项目(2010GQY0230) |
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| 摘 要： | 目的: 构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法: 提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG- AMPKα2重组质粒。转染pFLAG-AMPKα2至H9c2细胞,Western Blot测定AMPKα2的蛋白表达情况,建立缺氧/复氧(A/R)损伤模型,MTT法检测心肌细胞的存活率,生物自动分析仪检测LDH活性,流式细胞术检测各实验组心肌细胞凋亡程度、细胞内ROS的变化,试剂盒检测细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性。结果: AMPKα2全长基因序列克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4,酶切鉴定片段大小为1700 bp,Western blot检测转染pFLAG-AMPKα2后,AMPKα2蛋白在H9c2细胞中高表达。H9c2细胞遭受A/R损伤,心肌细胞存活率下降,LDH活性增加,细胞凋亡加重,ROS生成增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,pFLAG-AMPKα2重组质粒的导入可明显逆转、改善上述各项指标,从而对抗A/R损伤。结论: 构建成功的pFlAG- AMPKα2重组质粒能对抗A/R所致的心肌细胞损伤,其机制与改善心肌细胞的氧化应激作用有关。
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| 关 键 词： | AMPKα2 ,缺氧/复氧损伤,凋亡,ROS,氧化应激, |
| 收稿时间： | 2012-07-10 |
| 修稿时间： | 2012-11-14 |
Construction of eukaryotic plasmid of pFLAG-AMPKα2 and the effect on cardiomyocytes subjected to anoxia-reoxygenation injury |
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| LIU Dan,ZHONG Bin,WAN Qing,ZENG Shu,WU Xiao-mu,HE Ming. Construction of eukaryotic plasmid of pFLAG-AMPKα2 and the effect on cardiomyocytes subjected to anoxia-reoxygenation injury[J]. Acta Metallurgica Sinica, 2012, 17(12): 1333-1338 |
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| Authors: | LIU Dan ZHONG Bin WAN Qing ZENG Shu WU Xiao-mu HE Ming |
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| Affiliation: | 1.Nanchang University School of Medical College, Nanchang 330006, Jiangxi, China;2.Department of Neurology, Jiangxi Provincial People's Hospital, Nanchang 330006,Jiangxi, China;3.First Affiliated Hospital of Gannan Medical college, Ganzhou 341000, Jiangxi,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | AMPK Anoxia/reoxygenation injury Apoptosis ROS Oxidative stress |
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