| 易错PCR定向进化技术提高蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10核酸酶活性的研究 |
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| 引用本文： | 王珏,吴娜,张育敏,闫海洋,胡丽丽. 易错PCR定向进化技术提高蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10核酸酶活性的研究[J]. 化学与生物工程, 2022, 39(2): 23-27,51. DOI: 10.3969/j.issn.1672-5425.2022.02.006 |
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| 作者姓名： | 王珏 吴娜 张育敏 闫海洋 胡丽丽 |
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| 作者单位： | 山西中医药大学基础医学院 ,山西晋中030600 |
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| 摘 要： | 以分子伴侣skp修饰的蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10(A stragalus membranaceus pathogenesis-related protein-10)全基因为模板,通过易错PCR定向进化技术构建突变体文库,以酵母tRNA为底物建立高通量筛选方法,获得了核酸酶活性提高的AmPR-10突变体.经一轮定向进化后,突变体A4的核酸酶活性比野生型提高45％;测序结果显示,突变体A4基因序列在465位增加了1个碱基A,进而由移码突变引起了多肽序列的提前终止,使得突变体A4 C末端缺失了3个氨基酸;从空间上看,AmPR-10基因的突变减小了其C末端α螺旋对空腔的遮蔽作用,有利于目的蛋白与配体或底物的结合.该研究结果对AmPR-10核酸酶活性机制的探讨具有重要意义,为抗病抗逆黄芪植株的培育奠定了理论基础.
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| 关 键 词： | 易错PCR 定向进化 AmPR-10 核酸酶活性 |
Improvement in Nuclease Activity of Astragalus membranaceus Pathogenesis-Related Protein-10 (AmPR-10 ) by Error Prone PCR Directed Evolution |
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| WANG Jue,WU Na,ZHANG Yumin,YAN Haiyang,HU Lili. Improvement in Nuclease Activity of Astragalus membranaceus Pathogenesis-Related Protein-10 (AmPR-10 ) by Error Prone PCR Directed Evolution[J]. Chemistry & Bioengineering, 2022, 39(2): 23-27,51. DOI: 10.3969/j.issn.1672-5425.2022.02.006 |
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| Authors: | WANG Jue WU Na ZHANG Yumin YAN Haiyang HU Lili |
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