| 人葡萄糖调节蛋白78shRNA真核表达质粒的构建及其稳定转染A549细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 陈昌明,孙玲玲,林丽珠. 人葡萄糖调节蛋白78shRNA真核表达质粒的构建及其稳定转染A549细胞系的建立[J]. 中国生物制品学杂志, 2016, 0(4): 348-353 |
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| 作者姓名： | 陈昌明 孙玲玲 林丽珠 |
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| 作者单位： | 中国中医科学院博士后科研流动站;广州中医药大学第一附属医院肿瘤科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(81273963,81403227);广东省自然科学基金重点项目(S2012020010886) |
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| 摘 要： | 目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 k D,GRP78)shRNA真核表达质粒,并建立其稳定转染A549细胞系。方法根据Gen Bank中登录的人GRP78基因序列(3309)设计3对互补寡聚单链DNA干扰序列(GRP78-mi R-1、GRP78-mi R-2、GRP78-mi R-3)及1对阴性对照,分别插入至载体pc DNA6.2TM-GW/Em GFP,构建shRNA真核表达质粒。在Lipofectamine 3000介导下将各shRNA真核表达质粒分别转染A549细胞,并经Blasticidin S HCl加压筛选稳定的转染细胞系。实时荧光定量PCR和Western blot法检测A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平。结果各shRNA真核表达质粒经测序鉴定证明均构建正确。稳定转染shRNA真核表达质粒的A549细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与空白对照组比较,A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平明显降低(P0.05),阴性对照组无统计学意义(P0.05)。结论成功构建了人GRP78的shRNA真核表达质粒,并建立了其稳定转染的A549细胞模型,为进一步研究GRP78在肺癌细胞的侵袭和转移中的作用机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 人葡萄糖调节蛋白78 RNA干扰 真核表达 基因重组 A549细胞 |
Construction of eukaryotic expression vector for glucose regulated protein 78-shRNA and establishment of stably transfected A549 cell line |
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| CHEN Chang-ming;SUN Ling-ling;LIN Li-zhu. Construction of eukaryotic expression vector for glucose regulated protein 78-shRNA and establishment of stably transfected A549 cell line[J]. Chinese Journal of Bilogicals, 2016, 0(4): 348-353 |
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| Authors: | CHEN Chang-ming SUN Ling-ling LIN Li-zhu |
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| Affiliation: | CHEN Chang-ming;SUN Ling-ling;LIN Li-zhu;Post Doctoral Research Station, China Academy of Chinese Medical Sciences; |
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