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| 利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数 | |
| 引用本文： | 杨立桃,赵志辉,丁嘉羽,张承妹,贾军伟,张大兵.利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数[J].中国食品卫生杂志,2005,17(2):140-144. |
| 作者姓名： | 杨立桃 赵志辉 丁嘉羽 张承妹 贾军伟 张大兵 |
| 作者单位： | 1. 上海交通大学生命科学技术学院,上海,200240;南京大学生命科学学院,江苏,南京,210093 2. 南京农业大学动物医学院,江苏,南京,210095 3. 上海交通大学生命科学技术学院,上海,200240 4. 上海市农业科学院生物技术研究中心,上海市农业遗传育种重点实验室,上海,201106 |
| 基金项目： | 上海市科技兴农重点攻关项目 (农科攻字 (2 0 0 2 )第 3 -4 3号 )，上海市科学技术委员会科研计划项目 (0 3ZD0 5 0 3 2 )。~~ |
| 摘 要： | 为分析转基因水稻外源基因拷贝数，利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了14株T0代的转基因水稻植株，得到了外源基因插入分别为1、2、3和4的转基因植株，同时利用Southern Blot方法进行验证分析。随机选择18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株，用Southern Blot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数，Southern Blot分析结果显示有15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的，3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于Southern Blot的分析结果，主要原因是Southern Blot方法在同一个插入位点有多拷贝的T-DNA片段插入时，转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段，电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生，除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。 |
| 关 键 词： | 拷贝数 实时荧光定量PCR HPT 方法分析 外源基因 分析结果 DNA片段 转基因水稻 转基因植株 利用 |
| 文章编号： | 1004-8456(2005)02-0140-05 |
| 修稿时间： | 2004年12月18 |
Estimating copy number of transgenes in transformed rice by real-time quantitative PCR |
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| YANG Li tao,ZHAO Zhi hui,DING Jia yu,ZHANG Cheng mei,JIA Jun wei,ZHANG Da bing.Estimating copy number of transgenes in transformed rice by real-time quantitative PCR[J].Chinese Journal of Food Hygiene,2005,17(2):140-144. | |
| Authors: | YANG Li tao ZHAO Zhi hui DING Jia yu ZHANG Cheng mei JIA Jun wei ZHANG Da bing |
| Abstract: | |
| Keywords: | Plants Transgenic Rice Polymerase Chain Reaction Genes Dosage |
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