| 磁性微球用于蛋白-抑制剂复合物解离常数的快速测定 |
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| 引用本文： | 王秋玲,潘晓霞,吕波. 磁性微球用于蛋白-抑制剂复合物解离常数的快速测定[J]. 应用化工, 2013, 0(5): 950-954 |
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| 作者姓名： | 王秋玲 潘晓霞 吕波 |
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| 作者单位： | 天津大学药物科学与技术学院 |
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| 摘 要： | 以凝血酶与其选择特异性抑制剂阿加曲班为模型,应用磁性微球(MM)建立了一种快速测定蛋白-抑制剂复合物解离常数(Kd)的方法。该方法以四氧化三铁磁性微球为载体,在EDC/NHS偶联作用下制备了凝血酶包覆的磁性微球(Thrombin-MM),考马斯亮蓝G-250蛋白定量法间接测定蛋白键合量为4.1 mg/g,取5 mg Thrombin-MM与400μL一系列不同浓度的阿加曲班溶液混合振荡,应用高效液相色谱法通过测定平衡吸附前后药物浓度,代入Scat-chard模型,即得Kd值,与蛋白质数据库中值一致。吸附药物后的Thrombin-MM用含10%甲醇的PBS缓冲液洗脱,回收率约84%,Thrombin-MM可重复利用。
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| 关 键 词： | 磁性微球 蛋白-抑制剂 解离常数 凝血酶 阿加曲班 |
Magnetic microspheres used for the rapid dissociation constant determination of protein-inhibitor complex |
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| Affiliation: | WANG Qiu-ling,PAN Xiao-xia,Lü Bo(School of Pharmaceutical Science and Technology,Tianjin University,Tianjin 300072,China) |
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