脂肪酶Lip2在蚕丝表面交联固定及其催化性质

为开发廉价高效的蚕丝载体固定化酶制剂,研究使用1-乙基-3-(3-二甲基丙基)碳化亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和戊二醛(GA)三者组成不同类型的交联剂在蚕丝表面固定解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2,并研究固定化酶的催化特性.分别使用EDC/NHS、GA、EDC/NHS+GA活化蚕丝载体,并与Lip2共价交联制备得固定化脂肪酶Lip2(EDC/NHS)、Lip2(GA)和Lip2(EDC/NHS+GA).结果表明:Lip2(GA)的酶蛋白固定量最少但比酶活最高,而Lip2(EDC/NHS+GA)的酶蛋白固定量最高但比酶活最低.各固定化酶的最适pH皆为8.03,比游离Lip2偏碱.最适温度除了Lip2(EDC/NHS)为50℃,其他固定化酶与游离Lip2同为40℃.K~+对各固定化酶的最适激活浓度为0.10 mol·L~(-1),相比Lip2的0.15 mol·L~(-1)偏小;Ca~(2+)对所有酶都表现为促进作用,而Cl~-对所有酶无明显促进或抑制作用.Lip2(GA)的热稳定性最高,而Lip2(EDC/NHS+GA)重复使用性最好.