| hepaCAM基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 陶佳,王秋菊,范砚茹,杜红飞,宋学东,罗春丽,吴小侯.hepaCAM基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定[J].粉末涂料与涂装,2013,26(5):639-642. |
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| 作者姓名： | 陶佳 王秋菊 范砚茹 杜红飞 宋学东 罗春丽 吴小侯 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆,400016
2. 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(项目编号：81072086) |
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| 摘 要： | 目的构建表达肝细胞黏附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因的重组腺病毒质粒,并进行鉴定。方法以质粒pEGFP-N2-hepaCAM为模板,PCR扩增hepaCAM基因,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV上,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将重组腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-hepaCAM经PmeⅠ线性化,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒pAdEasy-1-hepaCAM经PmeⅠ线性化后,转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒AdI-hepaCAM,经大量扩增后,检测病毒滴度。RT-qPCR及Westernblot检测感染的BIU-87细胞内hepaCAM的表达。结果酶切鉴定证实重组腺病毒质粒pAdEasy-1-hepaCAM构建正确,重组腺病毒AdI-hepaCAM滴度可达1.6×1012pfu/ml,与空载体腺病毒组比较,经重组腺病毒感染的BIU-87细胞中hepaCAM mRNA及蛋白的表达均明显升高(P<0.05)。结论已成功构建携带hepaCAM的重组腺病毒载体AdI-hepaCAM,为研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞增殖的调控提供依据。
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| 关 键 词： | 黏附分子 腺病毒 膀胱癌 |
Construction and identification of recombinant adenovirus vector for expression of hepaCAM gene |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Adhesion molecules Adenovirus Bladder cancer |
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