| 抗菌肽PR-39重组腺病毒表达质粒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 刘涛,姚海,刘铭,李平,左国伟,王信,张健.抗菌肽PR-39重组腺病毒表达质粒的构建及鉴定[J].粉末涂料与涂装,2013,26(5):616-620. |
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| 作者姓名： | 刘涛 姚海 刘铭 李平 左国伟 王信 张健 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第一医院骨外科,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(项目编号：81071490) |
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| 摘 要： | 目的构建抗菌肽PR-39(Proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39)重组腺病毒表达质粒。方法从含抗菌肽PR-39核心编码区的质粒中扩增PR-39基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrace-TO4中,构建重组穿梭质粒,经PmeⅠ酶切线性化后,转化感受态AdEasier细胞,构建重组腺病毒质粒,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度检测。将重组腺病毒感染鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2,通过荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)的表达,RT-PCR法检测PR-39基因的转录水平。结果重组腺病毒穿梭质粒pAd-Trace-TO4-PR-39经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及测序鉴定证明构建正确;重组腺病毒质粒pAdPR-39经PacⅠ酶切鉴定,证明目的基因已整合到腺病毒基因组中;第4代重组腺病毒AdPR-39的病毒滴度为1010IU/ml;感染重组腺病毒AdPR-39的C3H10T1/2细胞可表达RFP;PR-39基因在C3H10T1/2细胞内成功转录。结论已成功构建携带RFP的PR-39重组腺病毒表达质粒,在鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2中可高效表达。
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| 关 键 词： | 抗菌肽 腺病毒 基因表达 红色荧光蛋白 |
Construction and identification of recombinant adenovirus vector for expression of proline-arginine rich 39-amino acid peptide |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Antimicrobial peptide Adenovirus Gene expression Red fluorescent protein(RFP) |
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