牛Ⅱ型链球菌van B2蛋白的原核表达及纯化 |
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作者姓名: | 刘燕 布日额 李艳军 白靓 锡林高娃 郭闯 |
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作者单位: | 1. 内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028043;内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所,内蒙古通辽028043; 2. 通辽市开鲁县动物疫病预防控制中心,内蒙古通辽,028400 |
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基金项目: | 内蒙古自治区高等学校科学技术研究项目(项目编号:NJZY12119) |
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摘 要: | 目的原核表达并纯化牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2蛋白。方法采用PCR法从牛Ⅱ型链球菌基因组DNA中扩增van B2基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-van B2,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Westernblot分析。结果 PCR扩增获得597 bp的van B2基因片段;重组表达质粒pET-28a-van B2经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组van B2蛋白相对分子质量约为29 000,主要以可溶性形式表达;纯化的重组蛋白纯度为70%,可被小鼠抗牛链球菌血清Ⅱ型多克隆抗体特异性识别。结论原核表达并纯化了牛Ⅱ型链球菌van B2蛋白,为van B2基因的耐药性研究奠定了物质基础。
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关 键 词: | 牛Ⅱ型链球菌 vanB2基因 原核细胞 基因表达 纯化 耐药性 |
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