基于负染-电镜的Aβ体外聚集表征测试要点分析 |
| |
作者姓名: | 张钊 董润敏 张莹 孙维敏 王荷 王欢 杨海强 温杰 |
| |
作者单位: | 北京交通大学理学院 生命科学与生物工程研究院,北京,100044 |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(No.81100809,No.81271417);北京市自然科学基金资助项目(No.7152090);中央高校基本科研业务费(No.2015JBM096);北京交通大学2015年大学生创新训练计划项目(No.150170038). |
| |
摘 要: | 本文应用电镜负染色技术,对阿尔茨海默病( Alzheimer′s disease, AD)中所涉及的β淀粉样肽(β?amyloid peptide,Aβ)的聚集规律进行了分析。通过对样品的浓度、pH值、温度和时间等设置系列梯度,以及调整负染试剂的种类、浓度和染色时间,优化了Aβ寡聚体样品制备以及电镜观察的最佳条件,获得了清晰的Aβ纤维图像并用以估算纤维长度。实验结果表明:经过六氟异丙醇给予单体化处理,并溶于无水二甲基亚砜( DMSO)的Aβ(100μmol·L-1),在pH7?2的PBS中4℃孵育24 h,Aβ寡聚体形态清晰,且Aβ42寡聚体比Aβ40寡聚体聚集趋势更明显。在pH 8?0的硼酸缓冲液中,Aβ42(40μmol·L-1)在37℃孵育72 h后,纤维形成明显;而Aβ纤维样品经过煮沸后再制备负染样品,所得电镜图像更为清晰,便于对纤维长度和结构进一步分析。因此电镜负染色技术,可作为一种快捷,直观的Aβ体外聚集形貌表征的质控方法。
|
关 键 词: | 透射电子显微镜 β-淀粉样蛋白 聚集 负染色技术 |
本文献已被 万方数据 等数据库收录! |