基于负染－电镜的Aβ体外聚集表征测试要点分析

本文应用电镜负染色技术，对阿尔茨海默病（ Alzheimer′s disease， AD）中所涉及的β淀粉样肽（β?amyloid peptide，Aβ）的聚集规律进行了分析。通过对样品的浓度、pH值、温度和时间等设置系列梯度，以及调整负染试剂的种类、浓度和染色时间，优化了Aβ寡聚体样品制备以及电镜观察的最佳条件，获得了清晰的Aβ纤维图像并用以估算纤维长度。实验结果表明：经过六氟异丙醇给予单体化处理，并溶于无水二甲基亚砜（ DMSO）的Aβ（100μmol·L－1），在pH7?2的PBS中4℃孵育24 h，Aβ寡聚体形态清晰，且Aβ42寡聚体比Aβ40寡聚体聚集趋势更明显。在pH 8?0的硼酸缓冲液中，Aβ42（40μmol·L－1）在37℃孵育72 h后，纤维形成明显；而Aβ纤维样品经过煮沸后再制备负染样品，所得电镜图像更为清晰，便于对纤维长度和结构进一步分析。因此电镜负染色技术，可作为一种快捷，直观的Aβ体外聚集形貌表征的质控方法。