| 人源弹性蛋白酶基因真核载体构建及表达 |
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| 引用本文： | 王海峰,许文涛,苏春元,邱芳萍,罗云波,谷新晰,田洪涛,黄昆仑.人源弹性蛋白酶基因真核载体构建及表达[J].食品工业科技,2011(10):215-219. |
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| 作者姓名： | 王海峰 许文涛 苏春元 邱芳萍 罗云波 谷新晰 田洪涛 黄昆仑 |
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| 作者单位： | 1. 长春工业大学化学与生命科学学院,吉林长春130012／中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083
2. 中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10Z440); 国家自然基金(30800770); 转基因生物重大专项(2008ZX08012-001) |
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| 摘 要： | 从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR（RT—PCR）扩增得到了ELA2B基因，并将其克隆到pGEM—Teasy载体中。然后用限制性内切酶EcoRI和NotI对重组质粒pGEM—Teasy／ELA2B和毕赤酵母质粒pHC9K进行双酶切，并且通过PCR技术去除ELA2B的信号肽，成功构建了真核表达载体pPIC9K／ELA2B，并将其转入毕赤酵母表达宿主GS115中。得到150株转化子，经含不同浓度G418的YPD平板筛选获得20株高拷贝转化子。甲醇诱导表达后．发酵液上清经SDS—PAGE检测，获得了大小约为28ku的目的条带。通过酪蛋白平板检测发酵液上清，出现透明圈．初步证明获得了有生物活性的弹性蛋白酶。
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| 关 键 词： | 人源弹性蛋白酶 毕赤酵母 基因克隆 蛋白表达 |
Construction and expression of eukaryotic vector of elastase gene in human |
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| WANG Hai-feng,XU Wen-tao,SU Chun-yuan,QIU Fang-ping,LUO Yun-bo,GU Xin-xi,TIAN Hong-tao,HUANG Kun-lun.Construction and expression of eukaryotic vector of elastase gene in human[J].Science and Technology of Food Industry,2011(10):215-219. |
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| Authors: | WANG Hai-feng XU Wen-tao SU Chun-yuan QIU Fang-ping LUO Yun-bo GU Xin-xi TIAN Hong-tao HUANG Kun-lun |
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| Affiliation: | WANG Hai-feng1,2,XU Wen-tao2,SU Chun-yuan2,QIU Fang-ping2,LUO Yun-bo2,GU Xin-xi2,TIAN Hong-tao2,HUANG Kun-lun2,(1. School of Chemical & Life Science,Changchun University of Technology,Changchun 130012,China,2. College of Food Science and Nutrition Engineering,China Agricultural University,Beijing 100083,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human elastase 2B pichia gene cloning protein expression |
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