犬细小病毒Proofman-LMTIA检测方法

为评价Proofman探针的梯型熔解温度等温扩增技术（LMTIA）检测核酸的性能，以Proofman-LMTIA快速检测犬细小病毒为例，采用实时荧光定量PCR方法和微滴式数字PCR方法进行对比分析。针对犬细小病毒基因的特异性序列设计引物和Proofman探针，通过优化反应条件，对方法的特异性、灵敏度进行测试，再通过实时荧光定量PCR方法、微滴式数字PCR进行对比验证。结果表明，所建立的Proofman-LMTIA方法在最适反应温度为61℃时，与猫、犬等基因组DNA无交叉反应，灵敏度达到8拷贝/μL，且能够在20 min内完成检测，与实时荧光定量PCR和数字PCR方法结果具有一致性。该方法不仅在恒温条件下即可扩增，且具有快速、灵敏、高效等优点，适用于病毒的现场快速检测。