靶向PD-1的shRNA慢病毒载体的构建

目的：设计以PD-1基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA)，构建重组慢病毒载体，鉴定此RNA干扰系列对PD-1基因表达的影响，从设计序列中筛选高(>90%)干扰效率的靶点序列(PD694/791)。方法：设计合成3种PD-1的shRNA干扰序列，与LV3载体连接，进行阳性鉴定，通过免疫印迹法(western)和阳性细胞数量检测筛选高干扰效率靶序列。结果：基于转染目的细胞的PD-1蛋白western检测结果，计算三种shRNA慢病毒载体的干扰效率分别为：PD791干扰效率为78%、PD 238干扰效率为8%、PD 694干扰效率88%。结论：成功构建靶向PD-1的shRNA慢病毒载体，其中干涉片段PD694和PD791对PD-1的干涉抑制效果显著，可以有效抑制原代T细胞PD-1表达，为研究开发PD-1抑制剂治疗肿瘤奠定基础。