组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建

该研究以高效组成型启动子P10替换pSIP401-gtamyhds中诱导型启动子，构建重组载体pSIP401Z-gtamyhds，并以其为基础框架，分别导入粪肠球菌（Enterococcus faecalis）来源的8种信号肽（s1～s8），采用电转化法将信号肽筛选载体转入具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27，构建组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重组粪肠球菌。以发酵上清液中α-淀粉酶活性为评价指标，对8种信号肽进行筛选，并对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy进行分离纯化和酶学性质研究。结果表明，信号肽s7对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高，发酵上清液中α-淀粉酶活性达到310 U/mL。重组Gt-amy的最适反应pH值为5.0，在pH 4.0～8.0范围内具有较好的稳定性，最适反应温度为80 ℃，于80 ℃的半衰期为3 h，在40 ℃条件下反应3 h，对玉米淀粉的降解率可达55.8%。