重组人血清白蛋白-干扰素β融合蛋白的分离纯化及质控方法的建立 |
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引用本文: | 李芝芹,邱爽,雷楗勇,陈蕴,金坚.重组人血清白蛋白-干扰素β融合蛋白的分离纯化及质控方法的建立[J].粉末涂料与涂装,2012,25(10):1325-1328. |
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作者姓名: | 李芝芹 邱爽 雷楗勇 陈蕴 金坚 |
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作者单位: | 江南大学医药学院药物设计与分子药理学实验室,江苏无锡,214122 |
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基金项目: | 国家自然基金资助项目(项目编号:30970029) |
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摘 要: | 目的建立中试制备重组人血清白蛋白-干扰素β(Recombinant human serum albumin-interferonβ,rHSA-IFNβ)融合蛋白的纯化工艺及质控方法。方法采用50 L发酵罐诱导表达rHSA-IFNβ融合蛋白,发酵液经超滤浓缩及脱盐后,再经BlueSepharose FF亲和层析、G25凝胶过滤层析和SP Sepharose FF阳离子交换层析纯化。SDS-PAGE(银染法)和HPLC测定融合蛋白纯度,Western blot分析反应原性,质谱法测定相对分子质量,Edman降解法测定N-末端氨基酸序列,等电聚焦电泳法测定等电点,细胞病变抑制法测定rHSA-IFNβ融合蛋白的生物学活性,其余检测项目均按《中国药典》三部(2010版)要求进行。结果纯化的3批融合蛋白纯度可达96%以上,具有人血清白蛋白和人干扰素β的双重反应原性,相对分子质量分别为89 070、89 035和88 669,N-末端氨基酸序列为:NH2-D-A-H-K-S,等电点为6.34,比活性分别为1.9×106、1.5×106和1.1×106IU/mg,其余各项指标均符合要求。结论已成功建立了中试制备rHSA-IFNβ融合蛋白的纯化工艺及质控方法。
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关 键 词: | 干扰素β 血清白蛋白 毕赤酵母 融合蛋白 质量控制 |
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