| 重组腺病毒Ad5/F35-HF2S的构建及其鉴定 |
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| 引用本文： | 李千音,黄峥兰,高淼,钟梁,冯文莉.重组腺病毒Ad5/F35-HF2S的构建及其鉴定[J].粉末涂料与涂装,2012,25(11):1434-1438. |
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| 作者姓名： | 李千音 黄峥兰 高淼 钟梁 冯文莉 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学临床血液学教研室 临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(项目编号：81070421) |
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| 摘 要： | 目的构建携带HA标签的重组腺病毒Ad5F35-HF2S。方法体外合成HA标签DNA双链,以K562细胞cDNA为模板,分别扩增FKBP1、FKBP2和SH2基因,依次亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV-HA中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAd5/F35在Ad5/F35-BJ5183感受态细胞中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S,经PacⅠ酶切线性化后,转染AD-293细胞进行包装、扩增,获得重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,经2轮扩增后,测定病毒滴度;采用PCR及Western blot法检测感染细胞中HF2S基因的转录及蛋白的表达。结果重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-HF2S及重组腺病毒质粒pAd5/F35-HF2S经鉴定均构建正确;经包装及2轮扩增后,重组腺病毒Ad5/F35-HF2S病毒滴度可达1013IU/ml;经PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的HF2S基因能够在AD-293细胞中表达。结论已成功构建了表达HF2S基因的重组腺病毒Ad5/F35-HF2S,为研究Grb2-SH2结构域在CML中的基因治疗和作用机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 生长因子受体结合蛋白 SH2 FKBP 重组腺病毒 AD-293细胞 |
Construction and identification of recombinant adenovirus Ad5/F35-HF2S |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Growth factor receptor-bound protein SH2 FKBP Recombinant adenovirus AD-293 cells |
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