| 黑鲷(Acanthopagrus schlegeli) CXC型趋化因子的体外表达及其生物学活性 |
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| 引用本文： | 张勇,蔡中华,高春萍,邢克智.黑鲷(Acanthopagrus schlegeli) CXC型趋化因子的体外表达及其生物学活性[J].高技术通讯,2008,18(3):306-311. |
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| 作者姓名： | 张勇 蔡中华 高春萍 邢克智 |
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| 作者单位： | 清华大学深圳研究生院,深圳,518055;大连水产学院海水养殖与生物技术重点实验室,大连,116023 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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国家重点基础研究发展计划(973计划)
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天津市科技创新能力与环境建设平台资助项目 |
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| 摘 要： | 采用DNA体外重组技术,将一个黑鲷CXC趋化因子基因亚克隆到pQE30表达载体并转化到大肠杆菌(M15)中诱导表达后,利用pH递降的缓冲液从金属亲和柱洗脱含6xHis标签蛋白的方法得以纯化,纯化产物的分子量约为8kDa,表达量约占蛋白总量的25%,以6xHis单抗为一抗,采用Western-blotting方法鉴定获得的蛋白为目的蛋白.对表达产物进行生物活性鉴定表明,该蛋白具有显著的嗜中性粒细胞和巨噬细胞的趋化活性(P<0.01,P<0.05),它对嗜中性粒细胞和头肾巨噬细胞的趋化能力呈剂量依赖性,且对嗜中性粒细胞的趋化能力大于对头肾巨噬细胞的作用,还能诱导改变嗜中性粒细胞和巨噬细胞对细菌的吞噬活性,但对嗜中性粒细胞吞噬能力的改变小于巨噬细胞.该趋化性因子在结构和功能上属不完全ELR CXC型趋化因子,兼具ELR CXC和ELR-CXC趋化因子的活性,是一种不成熟ELR CXC型趋化因子.
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| 关 键 词： | 黑鲷(Acanthopagrus schlegeli) ELR+CXC趋化因子 重组表达 生物活性 |
| 收稿时间： | 2007-03-26 |
| 修稿时间： | 2007年3月26日 |
Recombinant expression and functional characterization of a CXC chemokine in black seabream(Acanthopagrus schlegeli) |
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| Zhang Yong,Cai Zhonghua,Gao chunping,Xing Kezhi.Recombinant expression and functional characterization of a CXC chemokine in black seabream(Acanthopagrus schlegeli)[J].High Technology Letters,2008,18(3):306-311. |
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| Authors: | Zhang Yong Cai Zhonghua Gao chunping Xing Kezhi |
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| Affiliation: | **;Graduate School at Shenzhen;Qinghua University;Shenzhen 518055 |
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| Abstract: | With the method of DNA recombination in vitro,a black sea bream CXC (BSCXC) chemokine mature peptide cod- ing sequence was sub cloned into expression vector pQE30 and expressed in E.Coli M15.About 8kDa expressed protein was purified by Ni-NTA chromatographic technology and identified by Western blotting using 6xHis tag antibodies.The bioactivity assay showed that the expressed protein had significantly chemotactic activities towards both leucocytes and macrophages in a dose dependent manner (P<0.01,P<0.05),... |
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