睡莲(Nymphaea tetragona)叶部厚壁细胞内钙的定位

睡莲(Nymphaea tetragona)叶部厚壁细胞(1),将透过细胞化学法加以钙定位的研究,应用锇酸/焦锑酸钾(osmium tetroxide—potassium pyroantimonate,OTPA)与钙作用产生沉淀,再介著电子显微镜之观察,可成功地对于植物细胞内之钙加以定位(2)。不同发育时期之叶片切成小片之后,经过2.5％戊二醛/2％焦锑酸钾/0.1％单宁酸/0.1M磷酸缓冲液加以2小时的前固定后,再经1％锇酸/2％焦锑酸钾/0.1M磷酸缓行冲液的后固定,经过丙酮系列脱水后再包埋于Spurr胶中,超薄切片将直接观察,或经漂浮处理于50mM EGTA(pH7.9)或蒸馏水(pH 7.9),60℃,1 hr后再加以观察,部分切片则经由醋酸铀及柠檬酸铅双重染色,超薄切片以日立 TEM,H—600,75KV观察。