| 甲型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及在贝类检测中的应用 |
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| 引用本文： | 袁亚迪,孙世洋,卞莲莲,崔博沛,高帆,刘佩,刘令九,毛群颖,梁争论.甲型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及在贝类检测中的应用[J].粉末涂料与涂装,2020(1):55-60,65. |
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| 作者姓名： | 袁亚迪 孙世洋 卞莲莲 崔博沛 高帆 刘佩 刘令九 毛群颖 梁争论 |
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| 作者单位： | ;1.中国食品药品检定研究院肝炎病毒疫苗室;2.长春生物制品研究所有限责任公司 |
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| 基金项目： | 贝类中致病微生物富集过程及控制技术（2017YFC1600703） |
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| 摘 要： | 目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A,HAV)荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法,用于贝类中HAV的检测。方法选择HAV高度保守的5’UTR区设计引物及探针,以HAV质粒为标准品,HAV活病毒为样本,建立HAV qRT-PCR检测方法;验证该方法的特异性、灵敏度、重复性、准确性及中间精密度;采用建立的方法检测HAV活病毒和贝类样本,并与我国贝类HAV检测国标方法(GB/T22287-2008法)进行比较。结果通过14对引物探针分别对HAV质粒(101~108拷贝/μL)检测结果的比较,选择灵敏度最优的Pan1引物,建立了HAV qRT-PCR检测方法(PAN法)。PAN法对CVA16、CVB3、EVA71、PV等11种RNA病毒均无阳性扩增;灵敏度达10 TCID50/mL;检测2.699~5.699 LgTCID50/mL各浓度HAV活病毒的回收率为82.9%~127.0%,单人和双人检测的变异系数分别为3.0%~7.0%和2.6%~8.4%。PAN法检测HAV活病毒的灵敏度(10 TCID50/mL)优于GB/T22287-2008法;两种方法对20份贝类样本的检测结果均为阴性,符合率为100%。结论建立的PAN法具有良好的特异性、灵敏度、准确性、重复性和中间精密度,可用于贝类样本中HAV的核酸定量快速检测。
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| 关 键 词： | 甲型肝炎病毒 荧光定量RT-PCR 贝类 |
Development of fluorescent quantitative RT-PCR method for determination of hepatitis A virus and application in shellfish |
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| YUAN Ya-di,SUN Shi-yang,BIAN Lian-lian,CUI Bo-pei,GAO Fan,LIU Pei,LIU Ling-jiu,MAO Qun-ying,LIANG Zheng-lun.Development of fluorescent quantitative RT-PCR method for determination of hepatitis A virus and application in shellfish[J].Chinese Journal of Biologicals,2020(1):55-60,65. |
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| Authors: | YUAN Ya-di SUN Shi-yang BIAN Lian-lian CUI Bo-pei GAO Fan LIU Pei LIU Ling-jiu MAO Qun-ying LIANG Zheng-lun |
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| Affiliation: | (Division of Hepatitis Vaccine,National Institutes for Food and Drug Control,Beijing 100050,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis A virus(HAV) Fluorescent quantitative RT-PCR Shellfish |
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