| 摘 要： | 目的建立潮汐式生物反应器CelCradle~(TM)培养轮状病毒的工艺。方法利用500 mL的潮汐式生物反应器CelCradle~(TM)培养Vero细胞,通过葡萄糖含量监测及活细胞计数进行换液,待活细胞数目达2. 75×10~9个时,分别按0. 01、0. 05、0. 1和0. 2 MOI接种轮状病毒ZTR-68株,于37℃,5%CO_2培养箱中培养7 d,每天取样,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测病毒基因组核酸带型,免疫荧光法检测病毒增殖情况,透射电镜观察病毒的形态结构,蚀斑法检测病毒滴度,确定生物反应器CelCradle~(TM)培养轮状病毒的最适MOI。结果在CelCradle~(TM)反应器中接种3×10~8个Vero细胞,经7 d培养,活细胞数目可达2. 75×10~9个;以0. 05 MOI轮状病毒ZTR-68接种Vero细胞的病毒基因组带型与转瓶培养的保持一致,感染后3～5 d,轮状病毒荧光阳性细胞数目最多,电镜下可见形态结构完整的轮状病毒颗粒;以0. 05 MOI接种轮状病毒ZTR-68株96 h病毒滴度最高,为7. 7 LogPFU/mL。结论初步建立了潮汐式生物反应器CelCradle~(TM)培养轮状病毒的工艺,为进一步大规模生产轮状病毒灭活疫苗奠定了实验基础。
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