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| 稻瘟菌角质酶MGG＿09100的生物信息学分析及其原核表达 | |
| 作者姓名： | 王双 李孟建 黄凤兰 陈永胜 李国瑞 |
| 作者单位： | 1. 内蒙古民族大学生命科学与食品学院;2. 内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术研究中心;3. 内蒙古自治区蓖麻产业协同创新中心;4. 内蒙古自治区蓖麻育种重点实验室 |
| 基金项目： | 内蒙古自治区高等学校科学研究项目（NJZY20121）； |
| 摘 要： | 目的对稻瘟菌角质酶MGG09100进行生物信息学分析及原核表达。方法应用在线程序分析稻瘟菌角质酶MGG09100蛋白的保守结构域、信号肽剪切位点及跨膜结构域。PCR法扩增稻瘟菌角质酶MGG09100基因,克隆至原核表达载体pETM-10,构建原核表达质粒pETM10-MGG09100。重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达、变性、复性后,进行Ni-NTA亲和层析及分子筛层析分离纯化。结果稻瘟菌角质酶属α/β水解酶超家族,在第18和19个氨基酸之间存在信号肽剪切位点,前20个氨基酸中可能出现跨膜结构。经菌落PCR及测序验证,重组表达质粒pETM10-MGG09100构建正确。IPTG诱导表达产物大部分以包涵体形式存在,经变性、复性、纯化后,可溶性重组蛋白的相对分子质量约24 000,浓度可达6 mg/mL。结论成功构建了原核表达质粒pETM10-MGG09100,获得了可溶性稻瘟菌角质酶MGG09100蛋... |
| 关 键 词： | 稻瘟菌 角质酶 MGG09100 生物信息学分析 基因重组 原核表达 纯化 |
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