亲和层析法纯化重组大肠杆菌表达的亚油酸异构酶

亚油酸异构酶能够催化亚油酸(LA)生成不同类型共轭亚油酸(CLA),共轭亚油酸是一类由不同位置和几何异构体组成的有两个共轭双键的十八碳二烯酸,具有多种生理活性,且广泛存在于多种食物中。目前报道的丙酸杆菌虽能够生产t10,c12-CLA,但含量较低。为提高CLA的产量,以痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶基因为研究对象,利用PCR扩增亚油酸异构酶基因到大肠杆菌中表达,采用亲和层析的方法分离纯化重组大肠杆菌发酵液中的亚油酸异构酶。优化的亲和层析条件:上样量10 m L,流速0.25 m L/min。酶被纯化了13.22倍,比活力达12.30 U/(mg蛋白),回收率为94.84%。经SDS-PAGE检测,该蛋白分子质量为55 ku。采用气相色谱检测该蛋白催化LA生成t10,c12-CLA,酶活为(34.775±0.07)U/m L,该酶为亚油酸异构酶。