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| 磷脂酶D的重组表达及其在磷脂酰丝氨酸合成中的应用 | |
| 作者单位： | ;1.江南大学药学院糖化学与生物技术教育部重点实验室;2.广东双骏生物科技有限公司;3.江南大学生物工程学院粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 |
| 摘 要： | 对磷脂酶D(phospholipase D,PLD)进行重组表达,并探究其在生物催化合成磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)中的应用。以大肠杆菌E. coli BL21 (DE3)作为PLD的异源表达宿主,构建重组菌E. coli BL21(DE3)/p ET-28a(+)-sspld,通过蛋白分析确定其分子量,并对培养条件进行优化,进一步探究重组菌的酶学性质。在有机相-水相双相反应体系中进行PS的制备,并对制备工艺进行系统优化。成功构建了重组菌株E. coli BL21 (DE3)/p ET-28a(+)-sspld,通过蛋白分析确定其分子质量约为60 k Da。重组菌通过诱导条件优化,酶活最高可达38. 58 U/m L,是优化前的2. 26倍。PLD粗酶液的最适p H值为7. 5,最适反应温度为60℃。制备工艺优化结果表明40℃条件下,在8 m L的乙酸乙酯中溶解64 mg的卵磷脂,在4 m L酶液中溶解160 mg的L-丝氨酸,得到的PS转化率最高,可达28%,产量为1. 34 g/L。该PLD粗酶液催化性能良好,为酶法制备磷脂酰丝氨酸奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 磷脂酶D 磷脂酰丝氨酸 异源表达 酶学性质 催化条件 |
Recombinant expression of phospholipase D and its application in synthesizing phosphatidylserine |
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| Keywords: | |