6种克罗诺杆菌精准鉴定及标准物质的制备研究

目的 制备具有我国食源性特点的6种克罗诺杆菌检验用标准物质。方法 通过生化、MALDI-TOF MS及二代高通量全基因组测序技术对研究用菌株进行菌种鉴定确认后，制备104 CFU/样品浓度的标准物质。参照CNAS-GL003等标准要求对样品进行均匀性检验后，采用单因素方差分析对结果进行评价。将样品放于25 ℃和37 ℃及-20 ℃、4 ℃条件下，分别进行运输稳定性检验及储存稳定性检验。依据国家标准GB 4789.40，将研制的6种标准物质分别加入20件乳粉样品中进行检验，检测真实食品样品中适用性。组织3家实验室，对6种标准物质进行协作标定。结果 CMCC45413、CMCC45410、CMCC45414、CMCC45412、CMCC98025及CMCC45408生化鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌属(Cronobacter sakazakii group)，准确度为92%至99%；MALDI-TOF MS鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii），分数为1.914至2.244；全基因组测序鉴定结果与菌株已知种或亚种信息一致。均匀性测试结果符合正态分布，通过单因子方差分析，6种标准物质F值分别为0.422、0.922、0.980、0.409、0.721及0.631，F＜F0.05，符合均匀性要求。25 ℃及37 ℃ 放置7 d，6种标准物质中菌含量仍保持在104 CFU/样品。6种标准物质放置于4 ℃储存28 d及放置于-20 ℃储存90 d，菌含量均为104 CFU/样品，且存活率均在80%以上。20件真实乳粉样品中分别加入6种克罗诺杆菌标准物质进行检验，均可以检出；经3家实验室协作标定，6种克罗诺杆菌标准物质浓度均为104 CFU/样品。结论 本研究制备的6种克罗诺杆菌标准物质均匀性、稳定性、真实食品样品中应用验证及协作标定结果均符合要求，可应用于婴幼儿乳粉中克罗诺杆菌的检验。

Research on accurate identification of 6 kinds of Cronobacter and reference material preparation