单向锚定PCR富集扩增在克隆低丰度基因转录本中的应用 |
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引用本文: | 郑其平,余龙.单向锚定PCR富集扩增在克隆低丰度基因转录本中的应用[J].高技术通讯,1998,8(10):40-44. |
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作者姓名: | 郑其平 余龙 |
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作者单位: | 复旦大学遗传工程国家重点实验室 |
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基金项目: | 863计划资助项目,国家杰出青年基金项目,上海市科技发展重大项目 |
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摘 要: | 利用国际生物信息资源,通过计算机检索寻找与已知功能基因具有高度同源的ESTs,据此设计特异的PCR扩增引物,并通过单侧特异引物搭配cDNA分子库载体引物(锚定引物),在低严紧条件下扩增各种组织的cDNA分子库以富集目标片段。继以单向锚定PCR扩增产物为模板,用双侧特异引物再次扩增,获得的特异扩增PCR产物经测序证实之后,将其用作探针杂交筛选相应的cDNA文库并进而克隆目的基因的全长cD-NA。此方法用于三个人类新基因的全长cDNA的分离与克隆,结果全部获得成功。这三个人类新基因分别是H-RalGDS基因、H-CIS基因和H-S6PK基因,它们在GenBank数据库的登录号分别是:AF027169、AF035946及AF037447。本文结果提示这一方法对于应用现有的人类基因组生物信息资源,克隆具有重要生物学功能的人类新基因,尤其是克隆呈低丰度的基因转录本全长序列具有较高的实用价值。
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关 键 词: | 基因克隆 锚定PCR 低丰度转录本 扩增引物 |
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