| 靶序列富集多重PCR结合DHPLC同时检测5种食源性致病菌 |
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| 引用本文： | 刘忠梅,曾繁华,罗 佳,徐义刚,曲 敏,莫春生,刘新亮,李苏龙.靶序列富集多重PCR结合DHPLC同时检测5种食源性致病菌[J].食品安全质量检测技术,2015,6(6):2275-2282. |
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| 作者姓名： | 刘忠梅 曾繁华 罗 佳 徐义刚 曲 敏 莫春生 刘新亮 李苏龙 |
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| 作者单位： | 黑龙江出入境检验检疫局技术中心,大连出入境检验检疫局,辽宁出入境检验检疫局,黑龙江出入境检验检疫局技术中心,哈尔滨商业大学,哈尔滨商业大学,黑龙江出入境检验检疫局,黑龙江出入境检验检疫局 |
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| 基金项目： | 质检公益性行业科研专项(201310126) |
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| 摘 要： | 目的建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌5种食源性致病菌的简便、灵敏的高通量方法。方法根据GenBank公布的5种致病菌的特异性靶基因序列,设计5对特异性引物,与通用引物连接构成复合引物。经过反应条件的优化,建立了5种致病菌的靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)扩增方法,扩增产物采用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术进行检测。结果采用Tem-PCR-DHPLC方法,检测48株试验菌株,未发现非特异性结果。对5种致病菌检测灵敏度,除金黄色葡萄球菌为620 cfu/mL外,其余都小于100 cfu/mL。对4种样品的检测结果与国家标准方法相符合。结论 Tem-PCR-DHPLC检测方法,相比传统多重PCR方法,能有效地解决引物扩增效率不均衡的问题,不需优化引物浓度,方法特异性强,灵敏度高,具有较好的实用性。
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| 关 键 词： | 靶序列富集多重PCR 变性高效液相色谱 沙门氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌O157 金黄色葡萄球菌 志贺氏菌 |
| 收稿时间： | 2015/4/24 0:00:00 |
| 修稿时间： | 6/5/2015 12:00:00 AM |
Target enriched multiplex PCR coupled with high-performance liquid chromatography assay for simultaneous detection of five foodborne pathogens |
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| LIU Zhong-Mei,ZENG Fan-Hu,LUO Ji,XU Yi-Gang,QU Min,MO Chun-Sheng,LIU Xin-Liang and LI Su-Long.Target enriched multiplex PCR coupled with high-performance liquid chromatography assay for simultaneous detection of five foodborne pathogens[J].Food Safety and Quality Detection Technology,2015,6(6):2275-2282. |
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| Authors: | LIU Zhong-Mei ZENG Fan-Hu LUO Ji XU Yi-Gang QU Min MO Chun-Sheng LIU Xin-Liang and LI Su-Long |
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| Affiliation: | Heilongjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Dalian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,LiaoNing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Heilongjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Harbin University of Commerce,Harbin University of Commerce,Heilongjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau and Heilongjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | target enriched multiplex PCR denaturing high-performance liquid chromatography Salmonella Listeria monocytogenes Escherichia coli O157 Staphylococcus aureus Shigella |
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