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| 基于DNA染料EMA的RT-PCR技术定量检测海产品中病原性副溶血弧菌活细胞 | |
| 作者姓名： | 祝儒刚 吕淑霞 刘月萍 张良 |
| 作者单位： | 1.沈阳农业大学食品学院 2.辽宁大学轻型产业学院 3.沈阳农业大学生物科学技术学院 |
| 基金项目： | 教育部留学回国人员基金项目(2006331);辽宁省科技厅项目(20062109); 沈阳市科技局项目(1063312-1-00;090009) |
| 摘 要： | 将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术相结合,建立一种能选择性定量检测牡蛎中trh阳性副溶血弧菌活细胞的新方法。结果表明：使EMA成功插入死细胞DNA并且光解溶液中游离EMA的最佳曝光时间为20min;不抑制副溶血弧菌活细胞DNA扩增的最大EMA质量浓度为2.0μg/mL;完全抑制热致死细胞DNA扩增的最小EMA质量浓度为1.0μg/mL;人工污染牡蛎样品,不经过富集,在2.0×103～2.0×107CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且纯培养与人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测限均为2×103CFU,即人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测灵敏度为每克牡蛎样品400个活细胞;冻融实验表明,在温度低于55℃的水浴中对冷冻海产品进行解冻时,冻融过程对副溶血弧菌活细胞几乎没有影响。该方法是一种快速、灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法。 |
| 关 键 词： | EMA RT-PCR（real-time polymerase chain reaction） 海产品 副溶血弧菌 活细胞 |
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