| CRISPR- Cas12a 检测牛奶中大肠杆菌方法的建立与评价 |
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| 引用本文： | 冀霞,代绍密,余若菁,黄冰冰,刘家铭,李玮玮. CRISPR- Cas12a 检测牛奶中大肠杆菌方法的建立与评价[J]. 食品研究与开发, 2023, 44(18): 179-184 |
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| 作者姓名： | 冀霞 代绍密 余若菁 黄冰冰 刘家铭 李玮玮 |
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| 作者单位： | 1.惠州学院，广东 惠州 516007；2.惠州卫生职业技术学院，广东 惠州 516025 |
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| 基金项目： | 广东省基础与应用基础研究基金自然科学基金面上项目（2022A1515012602）；广东省教育厅普通高校青年创新人才项目（2019KQNCX150）；惠州学院教学质量工程建设项目（X-ZLGC2021009）；国家大学生创新训练项目（S202210577039）；广东省普通高校特色创新项目（2020KTSCX313） |
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| 摘 要： | 为提高牛奶中大肠杆菌的检测效率，简化分析流程，该文建立基于成簇的规则间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）的牛奶中大肠杆菌快速检测体系。首先，构建CRISPR 相关蛋白（CRISPR-associated protein，CRISPR-Cas），CRISPR-Cas12a 的重组表达质粒，并将其转化至BL21 感受态细胞，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（lsopropyl β-D-thiogalactoside，IPTG）诱导表达Cas12a 蛋白。然后，通过麦芽糖结合蛋白（maltose binding protein，MBP）亲和层析、凝胶过滤层析等方法将Cas12a 蛋白进行纯化。最后，设计靶向大肠杆菌16S rDNA 目的片段的特异性CRISPR RNA（crRNA），将特异性的crRNA、大肠杆菌16S rDNA 的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）胶纯化产物和纯化的Cas12a 蛋白进行混合，建立CRISPR-Cas12a 靶向切割体系。验证结果显示该体系可用于检测牛奶样品中的大肠杆菌。
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| 关 键 词： | CRISPR-Cas12a；牛奶；大肠杆菌；细菌检测；16S rDNA |
| 收稿时间： | 2022-12-06 |
Establishment and Evaluation of CRISPR-Cas12a Method for Detecting Escherichia coli in Milk |
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| JI Xi,DAI Shaomi,YU Ruojing,HUANG Bingbing,LIU Jiaming,LI Weiwei. Establishment and Evaluation of CRISPR-Cas12a Method for Detecting Escherichia coli in Milk[J]. Food Research and Developent, 2023, 44(18): 179-184 |
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| Authors: | JI Xi DAI Shaomi YU Ruojing HUANG Bingbing LIU Jiaming LI Weiwei |
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