高效液相色谱法检测发酵液中四氢嘧啶及羟基四氢嘧啶

为实现发酵液样品中四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶的分离检测，使用高效液相色谱（HPLC）技术建立一种测定中度嗜盐菌发酵液中四氢嘧啶及羟基四氢嘧啶含量的方法。使用乙醇抽提法提取样品，采用Vertex TM NH2 (4.6×250 mm,5μm)液相色谱柱对中度嗜盐菌发酵液中四氢嘧啶及四氢嘧啶进行了分析，选用紫外（UV）检测器，对比不同检测条件。通过色谱条件优化，选定了70%乙腈作为流动相，柱温30℃，检测波长210 nm，流速0.8 mL/min。发酵液样品中四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶在各自范围内线性关系良好，两种样品的平均回收率在99.2%～102%，精密度偏差在1%～2%范围内，检出限为1.5μg/mL，定量限为5μg/mL，分离度为1.70。该方法检测范围大，具有较好的重复性、分离度及稳定性，适用于发酵液中四氢嘧啶及羟基四氢嘧啶的分离检测。