| 阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶的原核表达及其多克隆抗体制备 |
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| 作者姓名： | 徐晓可 吴清平 张淑红 张菊梅 李程思 郭伟鹏 |
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| 作者单位： | 广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东省华南应用微生物重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,广东省微生物研究所,广东广州510070 |
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| 基金项目： | 广东省中国科学院全面战略合作项目(2010B090301037);广东省科技计划项目(No.2010B020316003) |
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| 摘 要： | 以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b(+),构建重组表达质粒pET22b-malA将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3),进行优化表达.采用尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.通过ELISA测定效价,并通过免疫荧光法鉴定与菌体表面结合能力结果表明克隆的目的基因全长1677bp,与Genebank的malA比较具有100％的同源性.带His标签的融合蛋白以包涵体形式表达,其最优化的表达条件是37℃下用0.8mmmol/L IPTG诱导5h.ELISA测定效价为5×105;免疫荧光法鉴定表明多克隆抗体能与阪崎肠杆菌表面结合.本实验为阪崎肠杆菌的免疫磁珠检测奠定了基础.
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| 关 键 词： | 阪崎肠杆菌 α-葡萄糖苷酶 克隆 原核表达 多克隆抗体 |
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