| 曲霉N1-14’高产L-苹果酸相关基因的克隆与分析 |
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| 引用本文： | 乐贤松,吴军林,吴清平,张菊梅,郭伟鹏.曲霉N1-14’高产L-苹果酸相关基因的克隆与分析[J].现代食品科技,2017,33(2):76-82. |
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| 作者姓名： | 乐贤松 吴军林 吴清平 张菊梅 郭伟鹏 |
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| 作者单位： | （1.中国科学院南海海洋研究所，广东广州 510301）（2.广东省微生物研究所，省部共建华南应用微生物国家重点实验室，广东省菌种保藏与应用重点实验室，广东省微生物新技术公共实验室，广东广州 510070）（3.中国科学院大学，北京 100049）,（2.广东省微生物研究所，省部共建华南应用微生物国家重点实验室，广东省菌种保藏与应用重点实验室，广东省微生物新技术公共实验室，广东广州 510070）（4.广东环凯微生物科技有限公司，广东广州 510643）,（2.广东省微生物研究所，省部共建华南应用微生物国家重点实验室，广东省菌种保藏与应用重点实验室，广东省微生物新技术公共实验室，广东广州 510070）,（2.广东省微生物研究所，省部共建华南应用微生物国家重点实验室，广东省菌种保藏与应用重点实验室，广东省微生物新技术公共实验室，广东广州 510070）,（2.广东省微生物研究所，省部共建华南应用微生物国家重点实验室，广东省菌种保藏与应用重点实验室，广东省微生物新技术公共实验室，广东广州 510070） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31271940） |
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| 摘 要： | 为了解曲霉(Aspergillus sp.)N1-14’的高产L-苹果酸(LMA)机制,提取其总DNA作模板,设计同源引物扩增包含丙酮酸羧化酶基因(pyc)和苹果酸脱氢酶基因(mdh)全长的片段并测序,再参考测序结果找到丙酮酸羧化酶(PYC)和苹果酸脱氢酶(MDH)的编码区,设计引物从N1-14’总cDNA扩增出其编码序列并通过TA克隆测序。测序结果显示pyc基因编码区长3582 bp,编码1193aa,分析结果显示PYC氨基酸序列在曲霉属内相当保守,同源性高达90%以上,其中N1-14’在两个保守位点出现突变,833位的A位于一个环区和1022位的F位于α-螺旋中部,可能与其高产酸活性相关;mdh编码区全长1023 bp,编码340aa。MDH氨基酸序列高度保守,突变株同样有两个保守区出现氨基酸点突变,且两点均出现在α-螺旋区域。本试验主要克隆两个曲霉N1-14’产L-苹果酸通路关键酶基因,分析其种属的特异性及预测特异氨基酸位点的功能,为继续探究N1-14’的高产LMA机制及相应的基因工程改造提升产酸水平奠定基础。
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| 关 键 词： | 曲霉N1-14’ PYC MDH 序列分析 |
| 收稿时间： | 2016/1/20 0:00:00 |
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