甘草黄酮合酶Ⅱ催化甘草素特异性合成7,4′-二羟基黄酮 |
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引用本文: | 孙甲琛,孙文涛,孙慧,吕波,李春.甘草黄酮合酶Ⅱ催化甘草素特异性合成7,4′-二羟基黄酮[J].化工学报,2022,73(7):3202-3211. |
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作者姓名: | 孙甲琛 孙文涛 孙慧 吕波 李春 |
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作者单位: | 1.石河子大学化学化工学院/新疆兵团绿色化工过程重点实验室,新疆 石河子 832003;2.清华大学化学工程系 生物化工研究所/工业生物催化教育部重点实验室,北京 100084;3.北京理工大学化学与化工学院 生物化工研究所/医药分子科学与制剂工信部重点实验室,北京 100081 |
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摘 要: | 利用同源序列比对和分子进化树分析从胀果甘草转录组数据库中挖掘并成功克隆到2个黄酮合酶基因:Gur.gene26505和Gur.gene26116。经表征Gur.gene26505为黄酮合酶Ⅱ,具有催化甘草素特异性合成7,4′-二羟基黄酮的特性,而Gur.gene26116为黄烷酮2位羟化酶,可催化甘草素生成包括7,4′-二羟基黄酮在内的三种产物。进一步通过蛋白质结构预测、分子对接和分子动力学模拟探究了黄酮合酶Ⅱ(Gur.gene26505)催化合成7,4′-二羟基黄酮特异性的原因。由于Gur.gene26505活性口袋附近特有的刚性结构β片层使大位阻苯丙氨酸残基翻转至羟化中心下方,消除了羟化产物2-羟基甘草素进入脱水中心的阻力进而发生C2-C3位的脱水反应特异性生成7,4′-二羟基黄酮。最后通过基因过表达、反应条件优化和强化菌体生长建立了7,4′-二羟基黄酮特异性合成的最佳细胞催化工艺,使甘草素转化率达到了76.67%。
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关 键 词: | 甘草黄酮合酶Ⅱ 甘草素 7 4′-二羟基黄酮 特异性转化 生物催化 |
收稿时间: | 2022-04-06 |
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