| 黑曲霉脂肪酶全基因合成及其在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 李娜,袁利玲,张玮莹,李书祥,袁永泽,杨江科,闫云君,刘德立. 黑曲霉脂肪酶全基因合成及其在毕赤酵母中的表达[J]. 化学与生物工程, 2010, 27(6): 45-49 |
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| 作者姓名： | 李娜 袁利玲 张玮莹 李书祥 袁永泽 杨江科 闫云君 刘德立 |
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| 作者单位： | 1. 华中师范大学生命科学学院,遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室,湖北,武汉,430079
2. 华中科技大学生命科学与技术学院,湖北,武汉,430074 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，科技部"863"资助项目，教育部博士点基金资助项目，湖北省科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 黑曲霉脂肪酶是重要的工业用酶,在食品、制药、前体化合物的合成和手性化合物的拆分等方面有广泛的用途。获得高效表达黑曲霉脂肪酶的基因工程菌是该酶工业化生产的前提。根据黑曲霉脂肪酶LIP的氨基酸序列及毕赤酵母密码子的偏爱性,设计合成26条相互重叠20 bp的引物,通过组装PCR分别合成lip基因的4个片段lipA1(300bp)l、ipA2(237 bp)l、ipA3(234 bp)和lipA4(210 bp)。再以基因头lip1和基因尾lip26为引物,以lipA1l、ipA2l、ipA3和lipA4混合物为模板进行第二轮PCR扩增,得到的产物经加A处理后,连接到载体pMD18-T上,挑取重组子测序。通过PCR扩增对人工合成的基因进行校正,得到完全正确的lip基因。将优化后的基因克隆到表达载体pPIC9K上,获得的重组质粒pPIC9K-lip经线性化后转化毕赤酵母GS115菌株,构建分泌型表达LIP的酵母工程菌,G418梯度筛选,得到高拷贝稳定整合菌株。为重组黑曲霉脂肪酶的规模化制备奠定了基础。
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| 关 键 词： | 黑曲霉 脂肪酶 全基因合成 毕赤酵母 表达 |
The Total Gene Synthesis of Aspergillus Niger Lipase and the Construction Expression in Pcihia Pastoris |
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| LI Na,YUAN Li-ling,ZHANG Wei-ying,LI Shu-xiang,YUAN Yong-ze,YANG Jiang-ke,YAN Yun-jun,LIU De-li. The Total Gene Synthesis of Aspergillus Niger Lipase and the Construction Expression in Pcihia Pastoris[J]. Chemistry & Bioengineering, 2010, 27(6): 45-49 |
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| Authors: | LI Na YUAN Li-ling ZHANG Wei-ying LI Shu-xiang YUAN Yong-ze YANG Jiang-ke YAN Yun-jun LIU De-li |
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