| 以长链PCR为基础利用融合PCR扩增乙型脑炎病毒全长cDNA |
| |
| 引用本文： | 李静,俞永新,安琪,杨力宏,孔艳. 以长链PCR为基础利用融合PCR扩增乙型脑炎病毒全长cDNA[J]. 中国生物制品学杂志, 2008, 21(12): 1047-1050,1053 |
| |
| 作者姓名： | 李静 俞永新 安琪 杨力宏 孔艳 |
| |
| 作者单位： | 武汉生物制品研究所，中国药品生物制品检定所疫苗一室 |
| |
| 摘 要： | 目的以长链PCR(Long-PCR)技术为基础,应用融合PCR方法扩增乙型脑炎病毒(JEV)全长基因组。方法根据GenBank中收录的JEV全长基因组序列设计引物,分别扩增JEVSA14-14-2株的5′和3′半长分子,在5′端上游引物中引入T7启动子核心序列。利用细胞培养增殖病毒,提取病毒RNA,逆转录后采用Long PCR方法得到JEV的5′和3′两个半长分子,在此基础上进行融合PCR,得到JEV全长cDNA分子,克隆入pGEMT-easy载体,酶切鉴定并测序。结果扩增出均6000bp的JEV的5′和3′两个半长分子及约11000bp的全长cDNA片段,其二级结构丰富的非编码区未发生缺失。JEV全长cDNA分子与GenBank中收录的相关毒株的的核苷酸序列同源性最高达99%,其氨基酸序列同源性最高达96.3%。其E蛋白基因与野毒株和减毒株进行比较,核苷酸序列同源性高达98%～99%,氨基酸序列也未出现较大差异。结论已获得了乙型脑炎病毒SA14-14-2株全长基因组,为进一步构建感染性克隆奠定了基础。
|
| 关 键 词： | 乙型脑炎病毒 全长cDNA 长链PCR 融合PCR |
Amplification of Full-length cDNA of Japanese Encephalitis Virus by Long PCR-based Fusion PCR |
| |
| LI Jing,YU Yong-xin,AN Qi,et al. Amplification of Full-length cDNA of Japanese Encephalitis Virus by Long PCR-based Fusion PCR[J]. Chinese Journal of Bilogicals, 2008, 21(12): 1047-1050,1053 |
| |
| Authors: | LI Jing YU Yong-xin AN Qi et al |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Japanese encephalitis virus Full-length cDNA Long PCR Fusion PCR |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
