| MBP融合肝素酶Ⅲ大肠杆菌高效表达体系构建 |
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| 引用本文： | 苏楠,吴敬君,李晔,张翀,李梅,邢新会.MBP融合肝素酶Ⅲ大肠杆菌高效表达体系构建[J].化工学报,2014,65(7):2829-2842. |
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| 作者姓名： | 苏楠 吴敬君 李晔 张翀 李梅 邢新会 |
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| 作者单位： | 1. 清华大学化学工程系, 工业生物催化教育部重点实验室, 生物化工研究所, 北京 100084;
2. 北京电子科技职业技术学院生物技术系, 北京 100029 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划项目（2012AA022201E）；博士后基金面上资助项目（2012M510460）。 |
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| 摘 要： | 肝素酶Ⅲ（heparinase Ⅲ，HepC）是一种重要的多糖裂解酶，在抗癌药物开发、低分子量肝素生产以及肝素类药物的质量控制等方面具有重要的作用。目前制约其工业应用前景的主要技术瓶颈是生产成本高，异源重组表达效果差，缺乏高效的表达方法。本研究借鉴前期经验，通过HepC基因的密码子优化，并与麦芽糖结合蛋白（maltose-binding protein，MBP）融合，构建了MBP-coHepC（基因密码子优化后的蛋白为coHepC）的大肠杆菌表达体系，结合培养条件优化大幅度提高了HepC的可溶表达比例，其摇瓶发酵总酶活值达到7603.46 IU·L-1；同时，本研究从转录和翻译水平揭示了HepC表达效果提高的可能原因。这些研究为肝素酶Ⅲ的应用发展提供了基础。
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| 关 键 词： | 麦芽糖结合蛋白 肝素酶Ⅲ 融合蛋白 序列优化 大肠杆菌 |
| 收稿时间： | 2014-03-31 |
| 修稿时间： | 2014-04-16 |
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