一个有利于细胞色素P450 BM-3催化吲哚合成靛蓝的三位点突变酶:D168L/E435T/V445A |
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作者姓名: | 张彭湃 胡升 梅乐和 雷引林 金志华 姚善泾 |
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作者单位: | 1.浙江大学生物工程研究所, 浙江 杭州 310027;2.浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院, 浙江 宁波 315100 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(21176220,31240054);浙江省自然科学基金重点项目(Z13B060008);宁波市重大科技项目(2011C11023)。 |
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摘 要: | 为进一步提高P450 BM-3催化吲哚合成靛蓝的能力,在前期获得的突变酶D168L/E435T基础上引入V445A突变,获得突变酶D168L/E435T/V445A,该突变酶与D168L/E435T及V445A相比,对吲哚的亲和力分别降低41.5%及35.8%,转化数(kcat)分别提高1.61倍及1.31倍,催化效率(kcatKm-1)分别提高1.53倍及1.47倍;该突变酶对电子的耦合率也提高至24.7%,较D168L/E435T提高39.5%,较V445A提高64.7%,说明该突变酶在电子的利用率上有明显改善;此外,该突变酶催化副产物靛玉红的比例大幅降低,降低为D168L/E435T的41.7%及V445A的30.6%,说明该突变酶催化吲哚的区域选择性上也更加有利于靛蓝形成。
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关 键 词: | 生物催化 酶 分子生物学 P450 BM-3 吲哚 羟基化 靛蓝 |
收稿时间: | 2013-08-11 |
修稿时间: | 2013-09-25 |
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