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一个有利于细胞色素P450 BM-3催化吲哚合成靛蓝的三位点突变酶:D168L/E435T/V445A
作者姓名:张彭湃  胡升  梅乐和  雷引林  金志华  姚善泾
作者单位:1.浙江大学生物工程研究所, 浙江 杭州 310027;2.浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院, 浙江 宁波 315100
基金项目:国家自然科学基金项目(21176220,31240054);浙江省自然科学基金重点项目(Z13B060008);宁波市重大科技项目(2011C11023)。
摘    要:为进一步提高P450 BM-3催化吲哚合成靛蓝的能力,在前期获得的突变酶D168L/E435T基础上引入V445A突变,获得突变酶D168L/E435T/V445A,该突变酶与D168L/E435T及V445A相比,对吲哚的亲和力分别降低41.5%及35.8%,转化数(kcat)分别提高1.61倍及1.31倍,催化效率(kcatKm-1)分别提高1.53倍及1.47倍;该突变酶对电子的耦合率也提高至24.7%,较D168L/E435T提高39.5%,较V445A提高64.7%,说明该突变酶在电子的利用率上有明显改善;此外,该突变酶催化副产物靛玉红的比例大幅降低,降低为D168L/E435T的41.7%及V445A的30.6%,说明该突变酶催化吲哚的区域选择性上也更加有利于靛蓝形成。

关 键 词:生物催化    分子生物学  P450 BM-3  吲哚  羟基化  靛蓝  
收稿时间:2013-08-11
修稿时间:2013-09-25
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