猪干扰素α基因的克隆与真核表达 |
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引用本文: | 李鹏飞,李明,程健,李伟伟,马鸣潇,张蕾.猪干扰素α基因的克隆与真核表达[J].粉末涂料与涂装,2010,23(4). |
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作者姓名: | 李鹏飞 李明 程健 李伟伟 马鸣潇 张蕾 |
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作者单位: | 辽宁医学院,辽宁,锦州,121000 |
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基金项目: | 辽宁省博士启动资金项目,辽宁医学院博士启动资金项目 |
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摘 要: | 目的克隆猪干扰素α(IFNα)基因,并在毕赤酵母中进行表达。方法用植物血凝素诱导猪外周血中的淋巴细胞,Trizol试剂提取总RNA,经RT-PCR扩增猪IFNα基因,将其克隆至pPIC9K载体中,构建重组真核表达质粒pPIC9K-IFNα,经PCR、酶切及测序鉴定正确后,电转化至毕赤酵母GS115中。筛选阳性菌株,经甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Westernblot分析。结果RT-PCR扩增获得521bp的猪IFNα基因;所构建的重组表达质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确;表达的目的蛋白相对分子质量约为19000,可溶性蛋白约占菌体总蛋白的13%;该蛋白能与相应抗体产生特异免疫反应。结论已成功克隆并在毕赤酵母中表达了猪IFNα基因,为进一步研究其生物学性状奠定了基础。
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关 键 词: | 猪IFNα基因 克隆 真核表达 毕赤酵母 |
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