莲藕渣多糖通过MAPK/NF-κB途径调节小鼠腹腔巨噬细胞的免疫应答

揭示莲藕渣多糖（Lotus Root Residue Polysaccharide，LRP）对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞的体外免疫调节作用，探讨LRP刺激腹腔巨噬细胞产生免疫应答的信号通路。利用MTT法测定不同浓度LRP对细胞活力影响；选用不同浓度梯度及同一浓度不同时间点的LRP刺激细胞，Griess法检测细胞NO释放量；半定量PCR检测细胞TLR4、TLR2受体及免疫关联因子（TNF-α、IL-6、iNOS、1L-1β、COX-2、Nfkbia）mRNA的表达，蛋白印迹法检测其MAPK通路（ERK1/2、JNK、p38）及Akt的磷酸化，同时研究了LRP对和蛋白AP-1及NF-κB的影响，对LRP对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节活性及其信号机制进行评估。研究表明，LRP对小鼠腹腔巨噬细胞无毒作用，25~50 μg/mL LRP促进细胞生长，细胞存活率为104.82%和102.53%（p<0.05）；NO浓度随LRP浓度提高而显著提高（p<0.05），200 μg/mL LRP刺激细胞产生一氧化氮（NO）为36.47 μmol/L，200 μg/mL的LRP处理细胞，NO产量随培养时间延长而增多（p<0.05），24 h时NO浓度为44.18 μmol/L；mRNA基因表达研究显示，LRP调控TLR4、TLR2受体，并调节免疫基因的表达；此外，LRP促进核蛋白c-Jun、p65由核外转向核内，增强ERK1/2、JNK、p38蛋白的磷酸化水平，但对于Akt的磷酸化没有显著影响。因此，莲藕渣多糖（LRP）可通过MAPK/NF-κB途径增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞免疫应答。