小鼠可溶性IL-5受体α胞外区基因的克隆及原核表达 |
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作者姓名: | 宋爱玲 蔡累 杨怡 王伟华 王增禄 张英起 李志奎 |
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作者单位: | 宋爱玲,杨怡,李志奎(第四军医大学西京医院,西安,710032);蔡累,王伟华,王增禄,张英起(第四军医大学生物技术中心,西安,710032) |
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摘 要: | 目的克隆并原核表达小鼠可溶性IL-5受体α(sIL-5Rα)胞外区基因。方法采用RT-PCR从BALB/c小鼠脾脏组织中分别扩增sIL-5Rα胞外区前后段基因片段,酶切后将两段基因连接,插入原核表达载体pPROEX中,构建重组表达质粒pPROEX/sIL-5Rα,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达。结果重组表达质粒经双酶切和DNA测序,证实构建正确。表达的sIL-5Rα胞外区蛋白相对分子质量约36100,表达量约占菌体总蛋白的30%,且可与兔抗小鼠sIL-5Rα单抗发生特异性免疫反应。结论已成功克隆并原核表达了小鼠sIL-5Rα胞外区基因,为进一步探讨sIL-5Rα对哮喘的治疗作用及开发新的哮喘治疗药物奠定了基础。
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关 键 词: | 可溶性IL-5受体α 胞外区 克隆 原核表达 |
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