不同核酸提取方法用于环介导等温扩增检测大西洋鲑鱼的比较分析 |
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引用本文: | 李秋萍,许文杰,崔晓文,操敏,熊晓辉,熊雄.不同核酸提取方法用于环介导等温扩增检测大西洋鲑鱼的比较分析[J].食品与发酵工业,2022(10):240-246+254. |
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作者姓名: | 李秋萍 许文杰 崔晓文 操敏 熊晓辉 熊雄 |
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作者单位: | 1. 南京工业大学食品与轻工学院;2. 江苏省食品安全快速检测公共技术服务中心 |
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基金项目: | 国家自然科学青年基金项目(31701668); |
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摘 要: | 环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)已被广泛应用于鱼类真伪鉴定。LAMP扩增成功的重要前提是获得高质量的核酸。目前为止,DNA提取方法种类繁多,但对适用于LAMP的提取方法缺乏全面的研究。该研究采用十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfonate, SDS)、Tagliavia、Heating以及2种常用市售试剂盒(Takara, Tiangen),对4种前处理的大西洋鲑鱼组织进行DNA提取,并对DNA得率、纯度、LAMP等方面进行比较分析。结果表明,这5种提取方法从不同前处理的样品中获得的DNA均可用于LAMP反应,采用琼脂糖凝胶电泳及荧光可视化检测都可观测到阳性结果。但在实时LAMP检测中,不同提取方法和不同样品前处理方式的Ct值均存在着极显著差异(P<0.01)。SDS和Tiangen这2种提取方法虽然DNA得率较低,但可获得高纯度的DNA,并在LAMP反应中有着更低的检测限。该研究结果为大西洋鲑鱼组DNA的提取和检测以及适用于LAMP技术的不同提取方法的研究提供了参考依据。
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关 键 词: | 环介导等温扩增 大西洋鲑鱼 核酸提取 灵敏度 |
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