一株热反硝化地芽孢杆菌Y62产耐高温α-淀粉酶的异源表达

为获得耐高温α-淀粉酶的菌株，该研究从常年覆盖热油的土壤中分离筛选产耐高温淀粉酶的细菌，通过形态学、生理生化分析和16S r RNA鉴定菌株种属，对筛选出的菌株进行中试工程化发酵产酶，下游酶分离中利用简便的硫酸铵沉淀法分离粗酶，并且对分离纯化的耐高温淀粉酶提取物进行热稳定评价。克隆菌株耐高温淀粉酶的基因序列并用于构建表达载体，在大肠杆菌BL21中成功进行异源表达，并对所产淀粉酶进行生物信息学分析。结果表明：通过筛选获得一株产淀粉酶的热反硝化地芽孢杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)Y62，中试放大后在48 h取得112.7 U/mL酶活，其粗酶回收率可达90.2%。该淀粉酶具有良好的耐高温特性，在100℃下仍能保持37.8%的活性。异源表达产物以包涵体的形式存在，改变诱导条件后溶出可溶性蛋白，纯化产物经过质谱鉴定后确定该淀粉酶为α-淀粉酶。生物信息学分析及预测表明该耐高温淀粉酶编码511个氨基酸，分子量为59.86 kDa，含2个跨膜区域、3个催化位点和2个Ca²⁺结合位点，与已报道的α-淀粉酶GTA相似。