| 鼠CCL5蛋白的原核表达与纯化 |
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| 引用本文： | Seitkamal N.Kuanysh,胡腾,宋玉竹,韩芹芹,夏雪山,张金阳.鼠CCL5蛋白的原核表达与纯化[J].昆明理工大学学报(理工版),2019,44(4):97-104. |
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| 作者姓名： | Seitkamal N.Kuanysh 胡腾 宋玉竹 韩芹芹 夏雪山 张金阳 |
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| 作者单位： | 昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明,650500;昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明,650500;昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明,650500;昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明,650500;昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明,650500;昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明,650500 |
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| 基金项目： | National Natural Science Foundation of China;Applied Basic Research Projects of Yunnan Province |
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| 摘 要： | 趋化因子(CCL5)是由正常T细胞分泌的典型的具有趋化活性的细胞因子,分子量8kD,属于CC型趋化因子的β家族成员之一,并调控T淋巴细胞的活性和分泌能力.本研究旨在克隆小鼠趋化因子CCL5基因并在原核表达系统中实现表达,获得与His标签融合的重组趋化因子mCCL5蛋白,并测定其在体外的趋化活性.将趋化因子CCL5基因扩增并插入pET-28a原核表达载体,转化至Rosetta感受态细胞中.重组mCCL5蛋白以IPTG诱导表达,再以Ni-NTA纯化系统进行纯化.Transwell实验检测重组CCL5蛋白的趋化活性.结果显示pET-28a-mCCL5原核表达载体成功构建,mCCL5蛋白在细菌中大量表达并主要以包涵体的形式存在.表达产物以SDS-PAGE和免疫印迹鉴定,Transwell实验证实趋化因子能够显著促进巨噬细胞RAW264.7细胞的迁移.带有His标签重组鼠趋化因子CCL5的成功表达,为下一步CCL5抑制剂的筛选奠定基础.
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| 关 键 词： | 趋化因子CCL5 原核表达 Transwell试验 活性测定 |
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