交替糖蔗糖酶在毕赤酵母中的重组表达、酶学性质及转化反应研究 |
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引用本文: | 戴悦,吴丹,郑璞,陈鹏程.交替糖蔗糖酶在毕赤酵母中的重组表达、酶学性质及转化反应研究[J].食品与发酵工业,2022(17):29-34. |
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作者姓名: | 戴悦 吴丹 郑璞 陈鹏程 |
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作者单位: | 江南大学生物工程学院 |
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摘 要: | 交替糖作为一种新型功能性低聚糖具有良好的益生作用。交替糖在自然界中的含量较少,主要通过发酵法和酶法制备,但目前交替糖蔗糖酶(alternansucrase, ASR)活性较低成为制约交替糖应用的主要因素。为促进交替糖的应用,该研究合成了密码子优化后的交替糖蔗糖酶基因,将其首次在毕赤酵母GS115中成功重组表达。3 L发酵罐高密度发酵72 h结果显示,重组菌发酵上清液中ASR酶活力为34.5 U/mL,约是摇瓶水平的12倍,也是目前重组ASR的最高表达水平。酶学性质研究表明,重组ASR的最适pH和最适温度分别是pH 6.0和55℃,Km和kcat分别是31.97 mmol/L,0.36 s-1。以蔗糖、蔗糖和麦芽糖等其他小分子糖为底物,在40℃, pH 5.5条件下利用重组ASR制备交替糖。将催化产物经薄层色谱初步分析,鉴定得出催化产物中生成了大量交替糖寡糖和交替糖多糖。该研究首次实现了交替糖蔗糖酶基因在毕赤酵母中高水平重组表达,并催化制备了交替糖,为ASR的异源表达及规模化制备交替糖提供了良好基础。
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关 键 词: | 交替糖蔗糖酶 毕赤酵母 异源表达 高密度发酵 催化反应 交替糖 |
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