利用重组酶高效转化制备稀有人参皂苷C-Mc1和C-Mc

为了高效制备稀有人参皂苷C-Mc和CMc1,调取了Terrabacter ginsenosidimutans中的人参皂苷酶基因，构建载体GST-bgpA,并转化到Escherichia coli C41(DE3)中表达，得到人参皂苷3-O-β-D-葡萄糖苷酶。该酶分子质量为72.4 kDa,转化人参皂苷Rc的最适pH为7.0,最适温度为40℃,米氏常数K_m值为6.25 mmol/L,V_m值为19.6 mmol/(h·L)。为了降低成本，利用粗酶转化人参皂苷Rc制备C-Mc1和C-Mc。粗酶制备C-Mc1的反应条件：20 g/L的人参皂苷Rc在40℃下酶反应24 h;制备C-Mc的反应条件：5 g/L的人参皂苷Rc在40℃下酶反应60 h。此条件下，粗酶转化制备并分离纯化得到C-Mc1和C-Mc的单体，并经HPLC检测，其纯度均在90%以上。C-Mc1的酶转化制备：产物得到C-Mc和C-Mc1,其摩尔得率分别为74.9%和11.1%。C-Mc的酶转化制备：C-Mc的摩尔得率为93.2%。该研究为稀有人参皂苷C-Mc和C-Mc1产业化提供了依据。