| 基于电击策略的三孢布拉霉遗传转化体系的优化及应用 |
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| 引用本文： | 沈思巧,杨培龙,曲音波,余晓斌,罗玮.基于电击策略的三孢布拉霉遗传转化体系的优化及应用[J].食品与发酵工业,2022(20):15-21+28. |
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| 作者姓名： | 沈思巧 杨培龙 曲音波 余晓斌 罗玮 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学生物工程学院;2. 农业农村部饲料生物技术重点实验室中国农业科学院饲料研究所;3. 山东大学微生物技术国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(21878123)；;微生物技术国家重点实验室开放课题项目(M2020-06)； |
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| 摘 要： | 电击转化是一种快速有效的转化方法，可广泛应用于微生物遗传操作。为了建立高效的适用于三孢布拉霉的遗传转化技术，该研究基于电转化策略对其原生质体转化进行了优化。首先对制备原生质体的酶解时间、电压大小与电脉冲时间、缓冲液种类、核酸浓度及再生培养时间等进行了单因素优化。然后通过正交试验分析，结果表明在电压为0.4 kV,电脉冲时间为2 ms条件下进行电击，之后再生培养3 h的转化效率最高，达到35.1 CFU/μg。随后以电转化重组了基因btwc-1c的表达载体为例，其转化效率约为30 CFU/μg。荧光定量PCR分析和表型分析结果表明转化菌中btwc-1c的表达水平和β-胡萝卜素的合成水平相对野生菌分别提升了2.5倍和2.1倍，该结果表明该研究建立的电转化三孢布拉霉原生质的方法能够高效实现受体菌对外源载体的摄取，为研究三孢布拉霉中关键调控基因的功能奠定了良好的基础。
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| 关 键 词： | 三孢布拉霉 电转化 原生质体 转化效率 |
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