重组C-反应蛋白的纯化与肽标记的同位素稀释质谱测定

本文依次采用Immobilized p-Aminophenyl Phosphoryl Choline Gel亲和层析柱和Superdex 75 10/300 GL分子筛层析柱分离纯化HEK293细胞重组C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP),对其进行了凝胶电泳、酶切、MALDI-TOF-MS鉴定,并利用蛋白质酶解-同位素稀释质谱法对其进行准确定量。结果表明,重组得到的样品符合CRP结构特征,液相纯度为96.527%,蛋白质酶解-同位素稀释质谱法定量的结果为3.32mg/g,扩展不确定度为0.19mg/g(k=2)。本文建立的蛋白质酶解-同位素稀释质谱法不受样品中肽类/蛋白类杂质的影响,提高了C-反应蛋白含量测定的准确度和精密度,定量结果可溯源至SI单位,为C-反应蛋白标准物质的研制奠定了基础。